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产品简介

组分	规格
2×XK Faster Taq PCR Mix(with blue dye)	5×1.0 mL

储存条件

-25~-15℃保存，保质期2年，干冰运输，避免反复冻融。

产品简介

本产品为2×浓度的快速扩增PCR预混液，产品中所含的DNA Polymerase是新型DNA聚合酶，具有极高的扩增速度与稳定性。

本产品包含合适浓度的Mg²⁺、DNA聚合酶和dNTPs，以及优化的缓冲体系，使用时只需添加模板和引物，并补水至1×浓度即可进行反应，可有效扩增3 kb以内的DNA片段。体系中包含有蓝色电泳指示剂，可在扩增完成后直接上样进行电泳检测，其迁移速度在1% TAE 琼脂糖凝胶中与500 bp双链DNA片段相近。本产品扩增产物3’端为粘末端，若纯化后用于T/A克隆，推荐使用本公司通用款克隆试剂盒（货号：XKL0606）。

适用范围

适用于常规PCR扩增。

产品特点

Ø 超快的延伸速度：10 s/kb；

Ø 优异的稳定性：优化的反应缓冲液，扩增高效、稳定。

Ø PCR产物带A尾，胶回收可与TOPO-TA载体（XKL0606）连接。

配制体系：

组分	25 µL体系	50 µL体系	终浓度
2×XK Faster Taq PCR Mix (with blue dye)	12.5 µL	25 µL	1×
10 µM上游引物*	1 µL	2 µL	0.4 µM
10 µM下游引物*	1 µL	2 µL	0.4 µM
模版DNA	见标注*	见标注*
ddH₂O	Up to 25 µL	Up to 50 µL

注*：（1）引物终浓度范围为0.2~0.8 µM，推荐使用0.4 µM，过少的引物会导致扩增失败或产量低，过量的引物可能导致非特异性扩增，可根据实际情况适当调整用量。

（2）模板推荐量：

基因组 DNA：10~1000 ng；

质粒 DNA：1~30 ng；

cDNA：1~2 µL (不超过PCR反应总体积的1/10)。

（以上为推荐的模板使用量，实际反应条件因模板、引物等的结构不同会存在一些差异，可根据模板、引

物、目的片段的特点设定最佳反应条件，并根据比例放大或缩小反应体系。）

推荐程序：

步骤	温度	时间	循环数
预变性*	95℃	3 min	1
变性	94℃	25 s	30-35
退火*	55-64℃	25 s
延伸*	72℃	10~15 s/kb
终延伸	72℃	1-5 min	1
保存	4℃	∞	-

*退火温度：参考引物Tm值，建议设置为引物中Tm较小值－3~5℃；如扩增产物特异性较差，或上下游引物Tm值相差较大，可先进行退火温度梯度预试验以得到最适退火温度，或尝试用Touchdown PCR程序进行扩增。

*延伸时间：常规模板推荐设置为10~15 s/kb，对于含扩增抑制物、难扩增模板、或需更高产量等的扩增，可以将延伸时间增加至20~30 s/kb。

循环数：30个循环可满足大部分扩增需要，若想获得更多产物，可增加循环数至35~40个。

扩增产物鉴定：

扩增产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳，无需添加Loading Buffer。

注意事项：

Ø 请使用高质量的模板进行扩增；

Ø 本产品不可用于细菌16S鉴定；

PCR Mix应避免反复冻融，短期内多次使用可置于2~8℃保存。使用前，Mix解冻后应充分混匀。

2×XK Faster Taq PCR Mix(with blue dye)说明书