产品货号：XK004

产品组分

*阳性对照质粒，抗性为Amp，用于验证感受态转化效率。

基因型

F- ompT hsdS_B(r_B-m_B-)gal dcm(DE3)

储存条件

-80℃保存6个月，避免反复冻融。

产品简介

BL21(DE3)菌株用于高效表达克隆于含有T7启动子的表达载体(如pET28a、pGEX4T-2)的无毒或低毒基因。其染色体整合有位于λ噬菌体DE3区的T7 RNA聚合酶基因，该基因可被lacUV5启动子启动并表达，因此该菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶。转化20 kb大小质粒效率无明显降低。多个外源基因的小量表达试验均取得良好结果，表明该产品蛋白表达能力优异。本产品经优化的感受态制备工艺制备而成，使用pUC19质粒DNA检测，转化效率可达1×10⁸cfu/µg。

适用范围

无毒或低毒蛋白原核表达。

注意事项

u 感受态细胞应保存在-80℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。

u 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行。

u 为防止转化实验不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，将损失降到最低。

u 感受态细胞应插入冰上缓慢融化（请勿用手握化）后立即加入目的DNA,此时转化效率最高（感受态细胞融化后长时间置于冰上不加目的DNA会降低转化效率）。

u 目的DNA不能超过感受态总体积的1/10。

u 微量目的DNA转化时，建议按照常规转化方法进行。

u T7启动子表达载体含有lacI基因时需要加IPTG(浓度为0.1~2 mM均可)。

操作步骤

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1. 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。

（一次转化感受态细胞的建议用量为50-100 µL，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。)以下实验以100 µL感受态细胞为例。

2. 向感受态细胞悬液中加入目的DNA ，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30分钟。

3. 将离心管置于42 ℃水浴中放置60秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2分钟，该过程不要摇动离心管。

4. 向每个离心管中加入700 µL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素），混匀后置于37℃，150 rpm，摇床振荡培养60分钟，目的是使菌体复苏。

5. 无菌条件下，取适量菌液加到含相应抗生素的SOB或 LB培养基上，用无菌的细菌涂布器或玻璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37 ℃培养12-16小时。（涂布用量可根据具体实验来调整。转化质粒在10 ng左右，90 mm平皿涂布100µl，55 mm平皿涂布50 µL。）

6. 保留剩余的菌液于4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。