产品组分

储存条件

长期保存，请置于-20℃，有效期24个月。

产品简介

本产品包括通过基因改造技术实现快速扩增和超高保真的DNA聚合酶，延伸速度可达4 kb/min。同时含有 dNTPs、Mg²⁺、优化的反应缓冲液、PCR反应的稳定剂等，浓度为2×。由于使用的超高保真DNA聚合酶具有极强的 3' → 5'外切酶活性，与普通高保真酶相比，保真性更高，是普通 Taq DNA Polymerase的128倍。DNA 扩增时，只需加入模板、引物和水，使XK 2× Phusion Hi-Fi Mix溶液的浓度为1×即可进行反应。扩增产物为平端，可直接用于无缝克隆实验。同时，反应产物可直接上样，通过琼脂糖凝胶电泳检测。本产品包含红色电泳指示剂，指示带在1%琼脂糖凝胶中的迁移速率与1.5 kb双链线性DNA相当。

产品特色

² 减少 PCR 操作时间

² 避免因多步操作带来的污染

² 优化的缓冲液，可用于低丰度模板、复杂模板或富含 GC/AT 模板的扩增

² 基因组 DNA 片段的扩增（≤15 kb）

² Plasmid DNA 片段的扩增（≤15 kb）

² 热启动，高特异性

适用范围

1. 超高保真 PCR 快速扩增，平端克隆，无缝克隆实验，基因定点突变。

2. 低丰度模板、复杂模板或富含 GC/AT 模板的扩增。

3. 长片段扩增。

配制体系

*. 使用时彻底融化、混匀。

**. 不同模板最佳反应浓度有所不同，下表为 50 µL 体系推荐的模板用量：

推荐程序

常见问题与解决办法

Q1：扩增无产物或产物量少？

A1：

1) 模板降解或模板纯度差。电泳检测模板质量，使用高质量模板；

2) 模板浓度过低。适当增加模板用量；

3) 引物不合适。优化引物设计；

4) 退火温度不合适。设置退火温度梯度，摸索合适的退火温度；

5) 循环数过少。适当增加5~10个循环；

6) 延伸时间不足。在粗提物做模板或者模板具有复杂序列的情况下，把延伸速度改成30-60 sec./kb。

Q2：扩增出现非特异条带或弥散带？

A2：

1) 引物特异性差。优化引物，避免非特异性条带以及引物二聚体的扩增；

2) 引物浓度过高。降低引物浓度；

3) 模板过量或纯度差。减少模板量，使用高质量模板；

4) 退火温度过低。适当提高退火温度或使用Touchdown PCR程序；

5) 循环数过多。减少循环数至25~30 cycles。