产品组成

自备耗材：酶标仪（能测450 nm处的吸光值）及二氧化碳培养箱（37℃，5%CO₂）、96孔细胞培养板、可调节式移液枪及枪头

储存条件

4℃避光保存12个月，-20℃可长期保存，避免反复冻融。如果经常使用，请置于4℃

产品简介

XKL Cell Counting Kit-8（CCK-8）是基于高度水溶性的四唑盐WST-8来进行测定的。WST-8在电子介体的作用下可被细胞中的脱氢酶还原生成水溶性甲瓒产物，产生颜色反应，其甲瓒产物为橙色，可溶于组织培养基中。CCK-8是非放射性的，可在细胞增殖和细胞毒性实验中，对活细胞进行灵敏的比色测定，从而计算出细胞数量。细胞中脱氢酶产生的甲瓒产物的量与活细胞的数量成正比,可用于检测细胞增殖和细胞毒性。CCK-8试剂检测灵敏度高于其他四唑盐（例如MTT，XTT，MTS或WST-1）。

适用范围

细胞增殖检测。

注意事项

1. CCK-8 对细胞的毒性相当低，因此细胞在CCK-8法检测后还可用于其他后续分析。

2. 如果OD值太低，可以采取适当增加细胞数量或者延长加入CCK-8后的孵育时间的办法。

3. 试剂盒依赖于脱氢酶催化的反应，影响活细胞中脱氢酶活性的条件或化学物质如还原剂会干扰检测。如果由于长期培养而改变了培养基的颜色或pH，请在添加CCK-8时更换培养基。

使用方法

注意：正式实验前，做预实验确定合适的细胞数量和孵育时间。若OD值太高，可适当减少细胞数量、缩短加入CCK-8的孵育时间或减少CCK-8的上样量。

一、制作标准曲线

1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞；

2. 按比例依次用培养基等比稀释细胞，一般要做5-7个细胞浓度梯度，每组4-6个复孔；

3. 接种后培养贴壁细胞或悬浮细胞0.5-4h，每100μL培养基加10μLCCK-8试剂，培养一定时间后测定OD450值，制作出一条以细胞数量为横坐标，OD450值为纵坐标的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量。使用此标准曲线的前提条件是试验条件完全一致。

二、细胞活性检测

1. 在96孔板中接种细胞悬液（100μL/孔），将板在培养箱中预先培养；

2. 在每孔中加入10μLCCK-8溶液，注意不要将气泡引入孔中，因为它们会干扰OD值读取；

3. 在培养箱中将平板孵育0.5-4h；时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定；

4. 使用酶标仪测量450nm处的吸光度。

三、细胞增殖/毒性检测方案

1. 在96孔板中接种100μL细胞悬液（5,000个细胞/孔），将板在培养箱中预培养24h；

2. 在平板中加入1-10μL各种浓度的待测物质；

3. 在培养箱中将平板孵育适当的时间（例如6、12、24或48h）；

4. 向板的每个孔中加入10μLCCK-8溶液，注意不要将气泡引入孔中，因为它们会干扰OD值读取；

5. 在培养箱中将平板孵育0.5-4h；时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定；

6. 使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。

结果计算

细胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]×100%

抑制率=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]×100%

As：实验孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8 溶液和药物溶液）；

Ac：对照孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8 溶液，不含药物）；

Ab：空白孔吸光度（含培养基、CCK-8 溶液，不含细胞、药物）。

FAQ:

1. 该产品比较敏感，偶有OD值偏高的现象，应该如何处理？

从三个方面进行调整：（1）用不同数目的细胞进行检测，制作标准曲线，确定合适的细胞数目；（2）缩短加入CCK-8的孵育时间；（3）减少CCK-8的上样量，使CCK-8稀释到合适浓度使用。

2. 如何判断本品的检测范围？

建议用自己的不同的细胞个数先做标准曲线，根据稳定线性趋势，确定特定细胞的检测数量区间。

3. 细胞毒性实验如何设置？

有两种设置方式：（1）100μL细胞悬液中加入1-10μL各种浓度的待测物质，孵育适当时间后，再加入体系中10%的溶液；（2）先将待检测物质作用细胞一段时间后，再利用CCK-8检测细胞增殖情况。

4. OD值在什么范围比较合适？

答：一般情况下OD值在0.1-2.0都可以，在1.0附近比较好。一般可将对照孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8 溶液，不含药物）的OD值控制在0.8-1.0左右，确定细胞的检测数量。

免责申明：该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。