产品组分

储存条件

长期保存，请置于-20℃，有效期24个月。经常使用，可置于4℃保存至少六个月。

产品简介

本产品包含高纯度的Fast Taq聚合酶、dNTPs、MgCl₂、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂，浓度为2×。适用于超快PCR反应（延伸速度可以达到5-10秒/kb，最短半小时完成PCR）、复杂模板如GC含量高（>60%），有二级结构等的扩增和大规模基因检测。短片段或者简单模板如质粒模板可以尝试5秒/kb延伸速度并采用较少循环数以进一步缩短PCR时间；长片段（≥3 kb）或者复杂模板产量较低时可以采用15-20秒/kb延伸速度或者采用较多循环数。本产品使用方便快捷，能避免PCR操作过程中的污染，使用时只需取适量XK 2×Fast Taq PCR Master Mix溶液，加入模板和引物，并加入去离子水补足体积，使Master Mix溶液的浓度为1×即可进行反应。产品已经加入染料（为蓝色），反应完成后，产物可直接电泳。蓝色染料可指示电泳进程，其迁移速度在1% TAE琼脂糖凝胶中与500 bp双链DNA片段相近。

适用范围

1) 基因检测：本产品不同批次之间误差很小，特别适合大规模基因检测，半定量PCR实验和微量DNA的检测。

2) 超快PCR扩增：如表达基因的克隆、细胞内基因点突变的分析（SNP）等。

3）PCR产物带A尾，胶回收可与TOPO-TA载体（XKL0601或者XKL0606）连接。

配制体系

*模板推荐量：基因组 DNA：10~1000 ng； 质粒DNA：1~30 ng； cDNA：1~2 μl。

（以上举例为常规PCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件，并根据比例放大或缩小反应体系。）

推荐程序

常见问题与解决办法

Q1：扩增无产物或产物量少？

A1：

1) 模板降解或模板纯度差。电泳检测模板质量，使用高质量模板；

2) 模板浓度过低。适当增加模板用量；

3) 引物不合适。优化引物设计；

4) 退火温度不合适。设置退火温度梯度，摸索合适的退火温度；

5) 循环数过少。适当增加5~10个循环；

6) 延伸时间不足。复杂模板可适当增加延伸速度至 20~30 s/kb。

Q2：扩增出现非特异条带或弥散带？

A2：

1) 引物特异性差。优化引物，避免非特异性条带以及引物二聚体的扩增；

2) 引物浓度过高。降低引物浓度；

3) 模板过量或纯度差。减少模板量，使用高质量模板；

4) 退火温度过低。适当提高退火温度或使用Touchdown PCR程序；

5) 循环数过多。减少循环数至25~30 cycles。

Q3：扩增出现拖带抹带

A3：

1) 模板过量。参照说明书推荐模板量，以cDNA、质粒、PCR产物等简单模板的扩增，需要稀释模板；

2) 延伸时间过长。按照说明程序设置合适的延伸时间；

3) 循环次数过多。减少循环数；

4) 退火温度过低。提高退火温度。