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产品组分

组分	XK003-01	XK003-02
XK GV3101 Chemically Competent Cell	10×100 µL	100×100 µL
*pCAMBIA2301(Control Vector)	10 µL(10 pg/µL)	10 µL(10 pg/µL)

*阳性对照质粒，抗性为Kana，用于验证感受态转化效率。

基因型

C58 (rif^R) Ti pMP90 (pTiC58DT-DNA) (gent^R) Nopaline

储存条件

-80℃保存6个月，避免反复冻融。

产品简介

根癌农杆菌GV3101染色体背景为C58，核基因上含有筛选标签——利福平抗性基因Rif；该菌株携带的pMP90 (pTiC58DT-DNA) 是一种无自身转运功能的胭脂型Ti质粒，质粒上含有的vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pMP90 (pTiC58DT-DNA) 质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体 T-DNA顺利转移；同时pMP90 (pTiC58DT-DNA) 型Ti质粒含有筛选标签Gent，赋予GV3101菌株庆大霉素抗；常用于拟南芥、烟草、土豆、玉米等植物的转基因操作。本公司生产的 GV3101 化学转化感受态细胞经特殊工艺制作，使用 pCAMBIA2301质粒DNA检测，转化效率可达1×10⁴cfu/µg。

适用范围

常用于拟南芥、烟草、土豆、玉米等植物的转基因操作。

注意事项

1. 进行转化操作时，应根据相应温度及无菌条件的要求进行，实验过程中轻柔操作。

2. 感受态细胞解冻后应立即使用，禁止反复冻融；

3. 质粒不纯或存在乙醇等有机溶剂的污染会影响其转化效率。

4. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

5. 利福平推荐的工作浓度控制在 20~25 μg/mL之间，过高的抗生素浓度会影响其生长速率和转化效率。本公司计算感受态转化效率所用的是 20 μg/mL Rif和 50 μg/mL Kana的YEB平板。

6. 由于Ti 质粒丢失的概率极低（可以忽略），所以一般培养农杆菌时不考虑添加相应抗生素。

操作步骤

1. 将感受态细胞从 -80°C中取出，在手心或室温片刻使其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中；

2. 每 100 μL感受态加入0.01-1 μg待转化的质粒 DNA （加入质粒 DNA 体积不超过10 μL），用手轻轻拨打管底混匀，依次于冰上静置10 min、液氮5min （或-70°C干冰乙醇浴 5 mi）n、37°C水浴 5 min、冰浴 5 min；

3. 加入900 μL无抗生素的无菌YEB或LB 液体培养基，混匀后于28°C振荡培养2~3小时。

4. 6000 rpm，1 min 离心收菌，留底部100 μL 左右菌液轻轻吹打重悬菌块，涂布于含相应抗生素的 YEB 或 LB平板上，倒置放于28°C培养箱培养 2~3天（当平板只含有50 μg/mL Kan时，28°C培养 48 h 即可；平板中同时加入50 μg/mL Kan，20 μg/mL Rif 时，需 28°C 培养 60 h；如果使用的平板含有 50 μg/mL Rif 时，则需要 28°C培养72~90 h）。

备注

1. GV3101农杆菌抗生素配方：

抗生素	配方	储存浓度	工作浓度
利福平（Rif）	DMSO溶解，0.22 µm滤膜过滤除菌	20 mg/mL	20 µg/mL
庆大霉素（Gent）	双蒸水溶解，0.22 µm滤膜过滤除菌	20 mg/mL	40 µg/mL
硫酸卡那霉素（Kana）	双蒸水溶解，0.22 µm滤膜过滤除菌	50 mg/mL	50 µg/mL

2. LB及YEB培养基的配制：

1）LB液体培养基（1 L）:

胰蛋白胨（Tryptone）	5 g
酵母提取物（Yeast extract）	1 g
牛肉（浸）膏	5 g
蔗糖（Sucrose）	5 g
MgSO₄ ·7H₂O	0.49 g

2） YEB液体培养基（1 L）:

胰蛋白胨（Tryptone）	5 g
酵母提取物（Yeast extract）	1 g
牛肉（浸）膏	5 g
蔗糖（Sucrose）	5 g
MgSO₄ ·7H₂O	0.49 g

根据以上配方，称取相应质量的试剂至合适的仪器中，加入去离子水至1 L，摇晃混匀，使用NaOH溶液调节pH至7.0。如配制固体培养基，则另加入15 g琼脂粉（Agar）。配制完成后，115℃高温高压灭菌30 min。

XK GV3101 Chemically Competent Cell